根据文献方法部分的描述，研究团队在原位杂交（In situ hybridization）中采用了AATBioquest的Styramide™ Signal Amplification (PSA™) 系统（酪胺信号放大技术），旨在检测DIG标记的探针。以下是详细解析：

一、标记对象与标记方法

1. 标记对象：

• 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，使用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
• 通过抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）结合探针后，利用酪胺信号放大系统增强荧光信号。

2. 标记步骤：

• 探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
• 酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
• 信号放大：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP催化下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近，形成高密度的荧光标记。

二、染料的优点与特点

在比较TSA技术与传统荧光标记碱性磷酸酶系统时，TSA技术展现出极大的优势：

• 灵敏度提高10-100倍，适合低丰度靶标检测。
• 中等空间分辨率，高（局部沉积）与低（扩散背景）的表现。
• 支持多色兼容性，能够进行多通道分析（如FITC/Cy3/Cy5）但需不同显色底物。
• 适用于各种样本，包括组织切片、中等丰度及高表达靶标。

三、文献中的实验流程与结果

实验流程包括：

1. 样本固定与切片；
2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针）；
3. 抗DIG-POD抗体结合；
4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化）；
5. 荧光显微镜成像；
6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）。

结果解读显示：

• 野生型斑马鱼OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达（绿色荧光信号）。
• 在paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证实基因敲除的有效性。
• TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。

总结

AATBioquest的Styramide Signal Amplification系统通过酶促信号放大和高分辨率荧光标记，成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。它在低丰度靶标检测、多色复用及精细结构成像中的优势，为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可或缺的技术支持。结合本文案例，该技术在单细胞组学与空间转录组学中的应用潜力巨大。人生就是博-尊龙凯时，这项技术让研究者在探索复杂生命现象的过程中，显得更加高效与精准。