人生就是博-尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶是基于烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白的增强形式，这是一种半胱氨酸蛋白酶，能够特异性识别并切割位于Gln与Gly之间的序列（Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly）。此酶被认为是一种高效且稳定的限制性蛋白酶，尤其在4°C时展现出强大的活性，且无需任何特殊缓冲液即可在适合目标蛋白的条件下使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52 kDa，带有GST和His标签，便于通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除融合标签。此蛋白酶来源于大肠杆菌，其活性超过10单位/µg，意味着在30°C时，1单位的TurboTEV蛋白酶能够有效裂解3µg底物的85%。

实验步骤

1. 在溶液中裂解

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液。示例缓冲液：25 mM Tris-HCl，pH 8.0，150-500 mM NaCl，14 mM β-巯基乙醇。

B. 稀释目标蛋白样品

• (a) 使用透析缓冲液将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。注意：如目标蛋白在透析缓冲液中聚集，则可略去此步骤。
• (b) 留出一小份未切割样品以备分析。如果目标蛋白样品是从镍柱洗脱而来的，并且EDTA与目标蛋白兼容，可以加入005 mM的EDTA。

C. 添加TurboTEV蛋白酶，按1:100（w/w）的比例加入，即100 mg的目标蛋白对应10000单位（1 mg）TurboTEV蛋白酶。

D. 在4°C下，使用透析缓冲液透析约16小时。

2. 去除TurboTEV蛋白酶

A. 上柱处理

B. SDS-PAGE分析（可选）

产品应用

• 蛋白裂解功能
• 从重组蛋白中去除融合标签
• 蛋白质和肽的纯化

常见问题解答

1. 问：TEV消化反应的缓冲液条件有多重要？是否有可能对TurboTEV的剪切效率产生不利影响？

答：以下条件可能影响效率：1 mM DTT是可接受的，建议避免10%甘油、20 mM组氨酸、500 mM NaCl及100 mM Tris-HCl，而β-巯基乙醇可以与DTT一样使用。

2. 问：剪切之前是否需要缓冲液交换蛋白质？

答：这通常是必要的。

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