人生就是博-尊龙凯时人非小细胞肺癌细胞HCC-827的培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：HCC-827

细胞类型：人非小细胞肺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：首次建议比例1:2，通常每两天更换培养基。

注意：在细胞培养时，使用无菌离心管收集瓶底培养基以作对比；如对比效果不佳，建议使用我们提供的完全培养基。

二、细胞处理指南

收到细胞后，请将其培养至良好状态，加入完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳处理方法。

细胞收到后，需用75%酒精消毒整个培养瓶，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态，随后进行后续处理。可通过显微镜观察细胞的生长状态，并保留各倍数的拍照记录（建议拍摄40x、100x、200x倍），前三天的照片是重要的售后依据，若无照片则默认细胞状态良好。

请注意：在将密封的培养瓶放入培养箱时，需适度松开瓶盖。在传代后，建议一瓶使用原配完全培养基，另一瓶使用自制培养基，以便对比效果。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，则将培养液收集至离心管并留存5ml培养基于37℃、5% CO2下培养；如细胞密度超过80%，即可传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞情况，若细胞呈现大部分圆形并脱落，立即将其取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重新悬浮。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至T25培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化。轻吹使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直放于-80℃冰箱。如果后续转入液氮罐，需在-80℃下保存超过24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内部无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能因贴壁不牢而容易脱落，属正常现象。请将培养液收集于离心管内并进行处理，通过1000rpm离心5分钟后，收集沉淀并加入胰酶继而消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基以终止反应，之后进行分瓶传代（两个T25瓶）。

五、售后条款

可重发的情况

1. 在运输过程中如出现细胞丢失、瓶身破损或严重漏液，均可申请重发。
2. 收到细胞后48小时内发现污染问题，提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货细胞若静置24小时或干冰发货细胞在复苏后24小时内大部分细胞未存活，需要提供真实清晰的状态照片，则可重发。
4. 若细胞在48小时内未通知出现问题，将视为质量合格。

不予重发的情况

1. 因客户原因造成的细胞污染不予重发。
2. 客户操作不当致使细胞状态不佳不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致的细胞问题不予重发。
4. 未能提供细胞培养前三天照片，将不予重发。

如有其他问题，欢迎咨询人生就是博-尊龙凯时，我们将竭诚为您服务。